Razjašnjavanje fizioloških uloga ljudske dipeptidil peptidaze III

Datum početka projekta
15.12.2015.
Datum kraja projekta
14.12.2017.
Status
Aktivan
Kategorija projekta
Projekti Fonda "jedinstvo uz pomoć znanja"
Ugovoreni iznos financiranja
1.704.882,35 HRK

Proteolitički enzimi (peptidaze) sudjeluju u regulaciji velikog broja ključnih procesa u stanici specifičnim cijepanjem odabranih ciljnih proteina. Iako su strukturno i biokemijski detaljno okarakterizirane, za mnoge peptidaze još uvijek nedostaju podaci o njihovim specifičnim supstratima i fiziološkoj ulozi.

Dipeptidil peptidaza III (DPP III) je citoplazmatska metalopeptidaza detaljno okarakterizirana na strukturnoj i enzimatskoj razini, ali njezina fiziološka uloga još je gotovo potpuno nepoznata. Aktivnost DPP III peptidaze prema četiri do deset aminokiselina dugim peptidima sugerira njenu ulogu u završnim fazama razgradnje proteina, dok njezina aktivnost i afinitet prema nekim biološki aktivnim peptidima upućuje na njenu ulogu u regulaciji boli, krvnog tlaka i upali. 

Nadalje, uključenost DPP III u odgovor na oksidativni stres putem interakcije s proteinom Keap1 detaljno je opisana, međutim niti jedna od predloženih funkcija proteina DPP III još nije dokazana, a također postoje indikacije da bi mogao imati ulogu i u drugim fiziološkim procesima u stanici. Predložena funkcija u signalnom putu Nrf2/Keap1, kao i česta prekomjerna ekspresija proteina DPP III u različitim tipovima tumora, sugeriraju da bi mogao biti korišten kao tumorski biljeg ili čak meta antitumorske terapije.

Cilj ovog projekta je određivanje fiziološke uloge i važnosti proteina DPP III u bolesti određivanjem njegovih interakcijskih proteina pomoću različitih molekularno-bioloških metoda. U radu ćemo koristiti tzv. metodu "yeast two-hybrid" (Y2H) za identifikaciju novih interakcijskih partnera proteina DPP III, kao i masenu spektrometriju (MS), za identifikaciju proteinskih kompleksa koji uključuju DPP III. Namjeravamo potvrditi interakcijske partnere proteina DPP III dobivene metodom Y2H i MS korištenjem nekoliko dodatnih metoda.

Potvrđeni interakcijski partneri pomoći će nam u identifikaciji signalnih puteva koji uključuju DPP III. Također ćemo testirati da li su novoidentificirani interakcijski partneri proteina DPP III i njegovi supstrati. Osim dobivanja uvida u fiziologiju proteina DPP III, ovaj projekt omogućit će prijenos tehnologije i znanja u Institut Ruđer Bošković, što će pozitivno utjecati na naš budući znanstveni rad, kao i predstavljati prvi korak u osiguravanju trajne financijske potpore istraživanja iz europskih fondova.

Voditeljica projekta

Dr. sc. Koraljka Husnjak
Institute of Biochemistry II, Goethe University School of Medicine, Frankfurt, Njemačka

Suvoditeljica projekta

Mihaela Matovina

Mihaela Matovina, dr. sc.

znanstvena suradnica +385 1 457 1223

Suradnici na projektu

  • Dr. sc. Marija Abramić, IRB, LBPMM
  • Zrinka Karačić, mag. chem., IRB, LBPMM
  • Ana Tomašić Paić, IRB, LBPMM
  • Snježana Jurić, IRB, LBPMM
  • Dr. sc. Akmaral Kussayeva, LBPMM, IRB
  • Sara Matić, mag. mol. biol., LBPMM, IRB

Aktivnosti na projektu

Mihaela Matovina je od 2.- 22.10.2016. bila u posjetu Laboratoriju dr. sc. Koraljke Husnjak na Institutu za biokemiju II, Medicinskog fakulteta Goethe Sveučilišta u Frankfurtu i radila  pokuse tzv. Dvostrukog hibridnog sustava kvasca (eng. Yeast-two-hybrid system, Y2H) za određivanje interakcijskih partnera proteina DPP III na razini cijelog ljudskog proteoma.

Zrinka Karačić, Ana Tomašić Paić i Mihaela Matovina su 10.2.2017. sudjelovale na 3. minisimpoziju o DPP III u Grazu, Austrija. Mihaela Matovina je imala poster pod naslovom „Metodologija analize DPP III interaktoma“.