Enzimi koji sudjeluju u sintezi purina predstavljaju obećavajuće mete za sintezu novih lijekova, posebno u bakteriji Helicobacter pylori, koja se oslanja isključivo na reciklirajući put sinteze purina (RPSP), a koji je slabo istražen. U predloženom projektu istražiti ćemo detaljno enzime RPSP, posebno njihove potencijalne stabilne ili prolazne protein-protein interakcije (PPI) u stanici. U prvoj aveniji projekta razviti ćemo protokol za istraživanje PPI u stanicama H. pylori temeljen na metodologiji BioID, koja je prikladna za detekciju čak i slabih ili prolaznih interakcija. Zatim će enzimi RPSP biti pročišćeni i karakterizirani (uporabom niza dostupnih biofizičkih metoda), a interakcije među njima biti će proučene in vitro i in silico. Ključne aminokiseline, identificirane računalnim metodama (dokiranje, simulacije MD) biti će mutirane, mutirani enzimi karakterizirani, te potvrđena njihova nemogućnost stvaranja interakcija (metodama AUC, ITC, nES GEMMA i drugima). Cilj nam je otkriti ostvaruju li ovi enzimi interakcije poput enzima iz de novo sinteze purina (organiziranih u tzv. purinosom), te predstavljaju li te interakcije ili sami enzimi potencijalne farmaceutske mete. U drugoj aveniji projekta ćemo se fokusirati na PPI između podjedinica oligomernih enzima RPSP, kako bismo otkrili aminokiseline presudne za komunikaciju među monomerima (tzv. ''hub residues''). Poznato je da je oligomerna organizacija enzima čvrsto povezana s njihovom alosteričkom regulacijom, no ne zna se mnogo o točnim rutama i mehanizmima alosterije. Stoga ćemo nastaviti naš rad na relacijskoj bazi proteinskih 3D-struktura i simulacija MD, na razvoju alata za izvlačenje informacija iz te baze i u završnici na potvrdi predviđenih ''hub residues'' enzima RPSP in vitro. Ovaj inovativan pristup svakako će doprinijeti razumijevanju fenomena alosterije.