Sekvenciranje DNA
Kategorija
- Usluge raznih namjena
U Zavodu za molekularnu biologiju (Laboratorij za molekularnu genetiku) smješten je uređaj SeqStudio Genetic Analyzer (CroRIS ID: 4608), 4-kapilarni stacionarni sustav za određivanje slijeda nukleotida u molekuli DNA i određivanje dužine fragmenata DNA primjenom Sangerove tehnologije.
Uputstva za korisnike
UPUTSTVA ZA PRIPREMU UZORAKA ZA REAKCIJU ODREĐIVANJA PRIMARNE STRUKTURE DNA
VAŽNOST PROČIŠĆAVANJA KALUPA
Za optimalne rezultate potrebno je kvalitetno pročistiti PCR-produkte prije sekvenciranja nekim od standardnih kitova za pročišćavanje PCR produkta iz gela.
Plazmidi također trebaju biti izolirani pomoću nekog od standardnih kitova za izolaciju plazmida ili pročišćeni kroz kolonicu.
KOLIČINA KALUPA:
Plazmid: 200-500 ng
PCR produkti: 50-500 ng, ovisno o veličini
maksimalni volumen: 14,5 mikrolitara
KOLIČINA KLICE:
Po jednoj reakciji dodaje se 0,5 mikrolitara 10 mikromolarnog primer-a (početnice).
Uzorci se donose u PCR tubici na ledu. Unaprijed se pomiješa 14,5 mikrolitara kalupa i 0,5 mikrolitara početnice. Tubicu označiti inicijalima i brojevima (npr. AM1, AM2, itd).
Također je važno da je kalup otopljen u vodi ili puferu koji ne sadrži EDTA.
Sekvence se rade svakog četvrtka. Molimo da se uzorci donesu dan ranije.
Korisnici unutar IRB-a plaćaju nalogom koji mogu dobiti u DNA servisu. Ostali korisnici trebaju dostaviti narudžbenicu s matičnim brojem ustanove na ime Helena Ćetković.
Voditeljica opreme:
Nikolina Škrobot Vidaček
mail: nskrobot@irb.hr