Prijeđite na glavni sadržaj

DNAPRO - Razumijevanje popravka unakrsnog vezanja DNA-Protein in vivo koristeći zebricu kao istraživački model

Kategorija
Projekti Hrvatske zaklade za znanost
Datum početka
1.2.2018.
Datum završetka
31.1.2023.
Status
Završen
Više informacija
Projektni resursi

Genetski modificirane linije ribe zebrice stvorene u okviru DNAPRO projekta koristeći CRISPR/Cas editiranje genoma su:

(1) ACRCΔEMCH/ΔEMCH

(2) ACRCΔ472-586/Δ477-586

(3) TDP1Δ45-616/Δ53-616

(4) TDP2a Δ244-449/ Δ244-449 

(5) TDP2a ΔE232/ ΔE232

(6) TDP2b Δ266-383/Δ266-383 

(7) Osim navedenih, u procesu je izrade XPA-/- linija koja je trenutno u heterozigotnom stadiju.

Optimizirani su slijedeći novi protokoli i modifikacije objavljenih metoda
  1. Sustavi za utišavanje 9 gena zebrice pomoću morfolino metode (sprtn, mre11, p97a, p97b, tdp1, tdp2a, tdp2b, acrc i xpa).
  2. Metoda izolacije DPC-ova pomoću KCl/SDS precipitacije iz embrija zebrice
  3. Metoda izolacije DPC-ova pomoću RADAR (Rapid Adduct Recovery)-a iz staničnih linija čovjeka i embrija zebrice
  4. Optimizirani su uvjeti za simultano utišavanje DPCR faktora u staničnoj liniji RPE1 pomoću siRNA: Tdp1 i Sprtn, Tdp2 i Sprtn, Tdp1 i Tdp2, Xpa i Sprtn
  5. Metoda detekcije TOP1, histone H3 I TOP2 DPC-ova

Projekti